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| 一种从泡叶藻中提取制备低分子岩藻聚糖硫酸酯的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201210424580.8, 申请日期: 2014-05-14, 公开日期: 2014-05-14
发明人: 韩丽君; 袁毅; 郭书举; 曲桂艳; 刘旭
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一种从泡叶藻中提取制备低分子岩藻聚糖硫酸酯的方法 其特征在于：1）将泡叶藻原料于40‑60℃下浸泡提取在泡叶藻原料干藻重量6‑10倍的稀盐酸溶液中1.3‑4.8h 酸浸泡后的泡叶藻固体继续加入其体积3‑6倍的水溶液 稀酸浸泡液待用 搅拌浸泡4‑7h 2）将上层漂浮物调节至ph5.5‑6.5 保留上层漂浮物 收集水浸泡液 在经过滤或高速离心 将上述依次经稀酸和水浸泡后固态藻体采用纳米高压均质机进行细胞破碎 将稀酸浸泡和水浸泡液合并待用 收集过滤液a 破碎后进行离心分离收集上清液b 3）将上述合并液、过滤液a和上清液b混合均匀后进行超滤去除盐分 而后超滤浓缩至原料重量的1/2体积（v/w） 4）将上述岩藻聚糖硫酸酯粗干品加入其3‑5倍重量的蒸馏水中进行溶解 浓缩液进行醇沉淀 溶解后通过装有deae‑sepharose f.f.的阴离子交换树脂柱进行洗脱 沉淀物干燥 收集洗脱液透析后于55‑65℃低温浓缩并冷冻干燥获得 即为岩藻聚糖硫酸酯粗干品 即得到原藻重量1.5‑2.3％的岩藻聚糖硫酸酯。 |
| 一种在贝类幼虫中定量检测甲状腺激素的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201210545897.7, 申请日期: 2014-01-22, 公开日期: 2014-01-22
发明人: 黄雯 ; 阙华勇; 许飞; 李莉; 张国范
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一种在贝类幼虫中定量检测甲状腺激素的方法 其特征在于:该方法包括如下步骤：1）将幼虫样品用液氮研磨法研磨成粉末状 2）研磨后进行低温干燥 分成ab两部分分别用于以下步骤 3）将a部分样品准确称量干重后 按固定比例加入0.01mol/l?naoh溶液 4）8000?12000rpm离心5?10min 2?8℃下充分浸润1h以上提取甲状腺激素 取上清 5）取步骤4）中的上清 用于定量检测甲状腺激素的含量 即总甲状腺素t4和总3 7）将步骤6）中裂解细胞释放蛋白用于检测样品中总蛋白含量 5 6）将b部分样品准确称量干重后加入细胞裂解液和pmsf室温放置1h以上 3′?三碘甲腺原氨酸t3 裂解细胞释放蛋白 8）将数据整合 计算出幼虫中每克蛋白含甲状腺激素x克 即xg/gprotein。 |
| 一种制备α-Fe2O3纳米球的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201210323134.8, 申请日期: 2013-05-01, 公开日期: 2013-05-01
发明人: 李鹏程; 魏振华; 邢荣娥; 刘松; 于华华; 秦玉坤; 李荣峰; 李克成; 李冰; 王雪芹
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一种制备α‑fe2o3纳米球的方法 其特征在于：1）以六水合三氯化铁（fecl3·6h2o）为铁源 其中 尿素（co(Nh2)2）为氢氧根离子引发剂 六水合三氯化铁与尿素摩尔比为1:1‑1.5 2）将上述微波处理后产物自然冷却后离心 将铁源与引发剂利用超声溶解于甘油和水组成的混合溶剂中 铁源浓度为1.0‑1.5mol/l 所得沉淀采用乙醇和水进行交替洗涤 而后置于密闭条件下进行微波处理 甘油和水体积比为1:2‑9 洗涤后干燥 在130‑150℃进行微波处理20‑50min 即得平均直径300‑500nm、整体结构由尺寸约20‑50nm的棒状纳米亚单元构成的α‑fe2o3纳米球。 |
| 一种从霞水母刺丝囊毒素内分离致死毒素蛋白的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027667.7, 申请日期: 2011-09-07, 公开日期: 2011-09-07
发明人: 李鹏程; 李荣锋; 于华华; 冯金华; 邢荣娥; 刘松; 秦玉坤; 李克成; 孟祥涛; 崔金会
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一种从霞水母刺丝囊毒素中分离致死毒素蛋白的方法 其特征在于：1)将霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎 2)将上述步骤1)上清液于2～6℃下用缓冲液透析过夜 破碎后2～6℃离心 然后低温离心 3)将步骤2)所得上清液过滤 收集上清液 收集上清液 而后用含con?a?sepharose?4b亲和柱进行分离 4)将步骤3)得到的上清液用强阴离子交换树脂mono?q预装柱纯化分离 待用 待用 分离时采用含有0.1～0.3mα?甲基?d?甘露糖苷和0.1～0.3mnacl的ph7.4 依次采用ph7.8 浓度10～30mm的tris?hcl缓冲液进行洗脱并收集洗脱液 浓度为10～30mm的tris?hcl缓冲液和含1m?nacl的ph7.8 低温离心 浓度为10～30mm的tris?hcl缓冲液进行梯度洗脱 收集上清液 流速为0.2～0.5mlmin?1 待用 收集约25～40min洗脱液 即为从霞水母刺丝囊毒素中分离致死毒素蛋白。 |
| 一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027643.1, 申请日期: 2011-08-24, 公开日期: 2011-08-24
发明人: 尤锋; 吴志昊; 王伟; 徐冬冬; 张毅; 张培军; 徐永立
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1尾仔鱼/0.05?0.5ml无水乙醇 一种提取单个鱼卵仔鱼微量总dna的简便快速方法 其特征在于：1)样品固定：采集鱼卵或仔鱼 滤去水后立即加入无水乙醇 2)样品中固定液的去除：取步骤1)所得已固定的单个鱼卵或仔鱼样品 而后于?20℃或室温保存备用 加入生理盐水洗涤 3)样品消化：取上述洗涤过的单个鱼卵或仔鱼 鱼卵或仔鱼与无水乙醇比例为：1ml鱼卵/2?5ml无水乙醇 1000?2000g离心20?60秒去除多余生理盐水 加入100?300μl?dna提取缓冲液和10?30μl细胞裂解缓冲液 4)提取总dna：将步骤3)消化至澄清的溶液中加入100?300μl?5?6mol/l?nacl溶液 再用滤纸吸干样品 使细胞破壁 震荡20?30秒。15000g离心30分钟 重复2?3次 而后将细胞破壁的单个鱼卵或仔鱼加入10?100μg蛋白酶k和10?100μg?rna酶 吸取上清液使蛋白质去除 震荡混匀 然后在上清液中加入等体积异丙醇 于50?70℃温育 轻轻混匀 每10?20分钟颠倒混匀一次 ?20℃静置1?2小时 消化至溶液澄清 15000g离心15分钟 待用 沉淀即得到单个鱼卵仔鱼微量总dna。 |
| 一种从霞水母刺丝囊毒素内分离热激蛋白60的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201010596892.8, 申请日期: 2011-08-17, 公开日期: 2011-08-17
发明人: 李鹏程; 李荣锋; 于华华; 冯金华; 邢荣娥; 刘松; 秦玉坤; 李克成; 孟祥涛; 崔金会
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一种从霞水母刺丝囊毒素中分离热激蛋白60的方法 其特征在于：1)将从霞水母触手中得到的霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎 2)步骤1)所得上清液即为霞水母刺丝囊细胞毒素于2?6℃下对ph7.820mm?tris?hcl缓冲液透析过夜 破碎后低温离心 然后低温离心 3)将步骤2)所得上清液过滤 收集上清液 收集上清液 而后将其上含deae?sepharosefast?flow的阴离子交换树柱进行分离 4)将步骤3)用截留分子量为3kda的超滤管浓缩的浓缩物用凝胶树脂superdex75柱纯化分离 待用 待用 首先采用ph7.820mmtris?hcl缓冲液洗脱 采用含有浓度为0.15?0.5m的nacl的ph7.820mm?tris?hcl缓冲液洗脱 而后采用含有浓度分别为0.1?2m不同浓度的nacl的ph7.820mm?tris?hcl缓冲液进行梯度洗脱 流速为0.2?0.5mlmin?1 收集各洗脱峰 收集各洗脱峰 而后用截留分子量为3kda的超滤管浓缩 其中流出体积50ml?80ml内的组分即为热激蛋白60。 待用 |
| 一种海蜇基因组DNA的提取方法-1 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201010166122.X, 申请日期: 2011-03-23, 公开日期: 2011-03-23
发明人: 崔朝霞; 张姝; 栾维莎; 刘媛
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一种海蜇基因组dna提取方法 其特征在于：1)将海蜇有性世代的海蜇碟状体置入体积浓度为95％的酒精中脱水并保存 2)将保存的蝶状体样品放入离心管中并直接加入buffer300～400ul匀浆、30～40ul质量浓度为10％的sds、3～5ul浓度为20mg/ml的蛋白酶k 封口后55～56℃消化0.8～1.0小时 3)将步骤2)中消化后的溶液取出加入6m?nacl 待用 振荡浑匀20～30s 10000～12000rpm离心20?30分钟 吸上清 而后加入上清液的0.7～1倍体积的异丙醇 ?20～?18℃沉淀10～15分钟 沉淀后取出 以10000～12000rpm离心15?20分钟 弃去液体 并用体积浓度为70％的乙醇 离心洗1～2次 自然室温凉干 即得到海蜇碟状体的dna。 |
| 一种对虾肠道微生物DNA的提取方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200910263665.0, 申请日期: 2010-06-23, 公开日期: 2010-06-23
发明人: 刘淮德; 王雷; 刘梅; 王宝杰; 蒋克勇
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一种对虾肠道微生物dna的提取方法 其特征在于：1)将0.01-0.05g对虾肠道在液氮下研磨 2)将洗脱液在200g离心5-10min 并加入0.8-1.2ml?pbs、15-25μl?pvpp匀浆和200-300μl?0.5％tween-80 取上清菌液待用 沉淀中加0.8-1.2ml?pbs以200g离心取上清菌液 3)将步骤2)所得上清菌液以1200g离心5-10min 均匀后吹打洗脱3-5min 将两次离心所得上清菌液合并 收集上清菌液 合并上清液以300g离心5-10min 4)将步骤3)所得上清菌液中加100-150μlctab提取液和10-15μl溶菌酶 取上清菌液待用 放入37℃摇床 而后加15-20μl?20％(W/c)Sds和10-15μl蛋白酶k 振荡30-40min 60-70℃水浴1-2h 5)将水浴后菌液在4℃?3200g离心8-15min 取上清菌液 6)将水浴后菌液以3200g离心8-15min 而后加100-150μl?ctab液和20-25μl?20％sds混匀后 取上清菌液 7)将步骤6)所得上清菌液中加上清菌液体积0.6-0.8倍的异丙醇 涡旋 而后加入与上述上清菌液等体积的酚/氯仿混合液 而后于-20℃静置1-2h 8)将步骤7)所得沉淀中加入600-800μl?70％预冷乙醇 60-70℃水浴10-15min 14000g离心10-15min 再以4℃?14000g离心10-15min 14000g离心10-15min 取上清菌液待用 所得沉淀待用 所得沉淀即为对虾肠道微生物dna。 |
| 一种分离纯化组蛋白H4的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200610047932.7, 申请日期: 2008-04-02, 公开日期: 2008-04-02
发明人: 李鹏程; 李翠萍; 于华华; 刘 松; 邢荣娥; 郭占勇; 陈晓琳; 冯金华
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1、一种分离纯化组蛋白h4的方法 其特征在于包括以下步骤：(1)提取样品：将50g-150g的海蜇样品破碎 而后将其在相对离心力为9160-29700g下离心10-30min 然后加入样品重量0.5-4倍的缓冲液 取上清液备用 (2)分离纯化：①加样前样品预处理：将步骤1)得到的样品在2℃-6℃下加入到离子交换剂中 放入2℃-6℃下 每隔8-12min搅拌一次 ②将已吸附蛋白的离子交换剂注入到层析柱中 浸泡0.5-48hh 共搅拌2-6次 用3-5倍床体积的缓冲液淋洗 ③洗脱：采用含有nacl的缓冲液 而后在相对离心力为573-1467g下 以60-90ml/h的洗脱速度进行阶段性洗脱 离心5-10min 收集组分。 弃去上清液 |
| 一种制备海带孢子体大分子量DNA的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200410011416.X, 申请日期: 2006-07-12, 公开日期: 2006-07-12
发明人: 段德麟; 王高歌; 胡自民
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1.一种制备海带孢子体大分子量dna的方法 其特征在于：可按如下步骤操作 2)将上述材料置于液氮中 1)取海带孢子体在清水中清洗后 迅速研成粉末 3)将藻粉转入sds提取缓冲液中 放入去多糖溶液中冲洗 63～65℃保温30min 4)加入kac溶液 以去除海带孢子体表面的多糖 混合均匀 5)离心 第二次去多糖 取上清 6)离心 加入氯仿：异戊醇抽提 水相用异丙醇于-18～-20℃沉淀 7)离心 乙醇洗沉淀 稍干后溶于te中 加入rnase 得产品。 |
