一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法

IOCAS-IR > 实验海洋生物学重点实验室

	一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法
	尤锋; 吴志昊; 王伟; 徐冬冬; 张毅; 张培军; 徐永立
	2011-08-24
专利权人	中国科学院海洋研究所.
公开日期	2011-08-24
专利类型	发明
摘要	本发明涉及一种DNA提取技术，具体地说是一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法。对采集的鱼卵或仔鱼进行固定保存。冲洗去除固定液后，加入DNA提取缓冲液和细胞裂解缓冲液，将鱼卵或仔鱼剪碎后再加入蛋白酶K和RNA酶，温育消化。用高浓度NaCl溶液沉淀蛋白质，加入异丙醇沉淀DNA，用70％乙醇洗涤沉淀去除盐离子，待乙醇挥发后加入超纯水或TE溶液溶解。本方法解决了常规总DNA提取方法在鱼卵或仔鱼等基因组DNA含量较少样品中应用的限制问题。
关键词	1尾仔鱼/0.05?0.5ml无水乙醇一种提取单个鱼卵仔鱼微量总dna的简便快速方法其特征在于：1)样品固定：采集鱼卵或仔鱼滤去水后立即加入无水乙醇 2)样品中固定液的去除：取步骤1)所得已固定的单个鱼卵或仔鱼样品而后于?20℃或室温保存备用加入生理盐水洗涤 3)样品消化：取上述洗涤过的单个鱼卵或仔鱼鱼卵或仔鱼与无水乙醇比例为：1ml鱼卵/2?5ml无水乙醇 1000?2000g离心20?60秒去除多余生理盐水加入100?300μl?dna提取缓冲液和10?30μl细胞裂解缓冲液 4)提取总dna：将步骤3)消化至澄清的溶液中加入100?300μl?5?6mol/l?nacl溶液再用滤纸吸干样品使细胞破壁震荡20?30秒。15000g离心30分钟重复2?3次而后将细胞破壁的单个鱼卵或仔鱼加入10?100μg蛋白酶k和10?100μg?rna酶吸取上清液使蛋白质去除震荡混匀然后在上清液中加入等体积异丙醇于50?70℃温育轻轻混匀每10?20分钟颠倒混匀一次 ?20℃静置1?2小时消化至溶液澄清 15000g离心15分钟待用沉淀即得到单个鱼卵仔鱼微量总dna。
申请日期	2011-01-21
专利号	CN201110027643.1
语种	中文
专利状态	公开
申请号	CN201110027643.1
文献类型	专利
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17301
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	尤锋,吴志昊,王伟,等. 一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法. CN201110027643.1[P]. 2011-08-24.

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