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| 一种从泡叶藻中提取制备低分子岩藻聚糖硫酸酯的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201210424580.8, 申请日期: 2014-05-14, 公开日期: 2014-05-14
发明人: 韩丽君; 袁毅; 郭书举; 曲桂艳; 刘旭
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一种从泡叶藻中提取制备低分子岩藻聚糖硫酸酯的方法 其特征在于：1）将泡叶藻原料于40‑60℃下浸泡提取在泡叶藻原料干藻重量6‑10倍的稀盐酸溶液中1.3‑4.8h 酸浸泡后的泡叶藻固体继续加入其体积3‑6倍的水溶液 稀酸浸泡液待用 搅拌浸泡4‑7h 2）将上层漂浮物调节至ph5.5‑6.5 保留上层漂浮物 收集水浸泡液 在经过滤或高速离心 将上述依次经稀酸和水浸泡后固态藻体采用纳米高压均质机进行细胞破碎 将稀酸浸泡和水浸泡液合并待用 收集过滤液a 破碎后进行离心分离收集上清液b 3）将上述合并液、过滤液a和上清液b混合均匀后进行超滤去除盐分 而后超滤浓缩至原料重量的1/2体积（v/w） 4）将上述岩藻聚糖硫酸酯粗干品加入其3‑5倍重量的蒸馏水中进行溶解 浓缩液进行醇沉淀 溶解后通过装有deae‑sepharose f.f.的阴离子交换树脂柱进行洗脱 沉淀物干燥 收集洗脱液透析后于55‑65℃低温浓缩并冷冻干燥获得 即为岩藻聚糖硫酸酯粗干品 即得到原藻重量1.5‑2.3％的岩藻聚糖硫酸酯。 |
| 一种从扇贝内脏中提取天然牛磺酸的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310309620.9, 申请日期: 2013-11-27, 公开日期: 2013-11-27
发明人: 李鹏程 ; 李婷; 邢荣娥; 刘松; 于华华
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一种从扇贝内脏中提取天然牛磺酸的方法 其特征在于：a)以扇贝为原料 b)将上述收集的上清液加入活性炭进行脱色处理 烘干后用高速粉碎机粉碎 过滤收集清液 c)调节上述收集清液的ph值 粉碎后粉末于蒸馏水中55℃‑80℃ 待用 而后去除清液中酸性沉淀蛋白质和碱性沉淀蛋白质 d)将上述清液减压浓缩 恒温水浴保温1‑3h 过滤收集清液 所得浓缩液经纯化处理即为天然牛磺酸。 过滤收集清液 待用 待用 |
| 一种从沙蜇刺丝囊毒素内分离溶血毒素蛋白的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110414952.4, 申请日期: 2012-06-27, 公开日期: 2012-06-27
发明人: 李鹏程; 李荣锋; 于华华; 邢荣娥; 刘松; 秦玉坤; 李克成; 李冰; 孟祥涛; 崔金会
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一种从沙蜇刺丝囊毒素中分离溶血毒素蛋白的方法 收集采用含0.2m?nacl的磷酸缓冲液洗脱下的组分 其特征在于：1)将处理后的沙蜇刺丝囊细胞上清液经微孔滤膜过滤 所述洗脱液为含不同浓度nacl的磷酸缓冲液 滤液经含deae?sepharose?fast?flow阴离子交换柱 Nacl浓度分别为0、0.1、0.2、0.3和2m 采用洗脱液以1?3mlmin?1流速进行纯化分离 2)将上述所得洗脱组分经微孔滤膜过滤 收集洗脱液在低温下用3～5k的超滤管进行浓缩 滤液经凝胶色谱柱superdex200采用0.15m?nacl 待用 10～50mm ph7.0pbs缓冲液以0.2～1.0mlmin?1流速进行分离纯化 收集洗脱体积处于60～80ml的洗脱液 而后在2～6℃下用3～5k的超滤管进行浓缩 浓缩后即得到从沙蜇刺丝囊毒素中分离溶血毒素蛋白。 |
| 一种化合物2,3-二溴-4,5-二羟基苯甲基甲醚的制备方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201010261794.9, 申请日期: 2012-03-14, 公开日期: 2012-03-14
发明人: 韩丽君; 郭书举; 袁毅; 李宪璀; 李婷
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一种化合物2 3?二溴?4 2)将上述浸泡液在62?65℃下减压浓缩至干 5?二羟基苯甲基甲醚的制备方法 得到浸膏 3)溶解后浸膏中加入等体积的乙酸乙酯入震动摇荡至水相接近无色 其中石油醚和乙酸乙酯混合液按体积比为1∶1进行混合 其特征在于：1)将粉碎后原料扇形叉枝藻与85?95％的乙醇按体积比为1∶10?1∶12的比利浸泡24?48小时 而后将浸膏中加入其5?10倍体积的水进行溶解 萃取分离 4)将上述乙酸乙酯相溶液通过硅胶装柱分离 待用 乙酸乙酯相溶液保留待用 并用乙酸乙酯相溶液2?3倍体积的石油醚和乙酸乙酯混合液洗涤 收集洗脱液并减压浓缩至干 5)将上述溶解液经凝胶柱依次用洗脱液洗脱 浓缩物溶解待用 收集洗脱液纯化后即得到化合物2 3?二溴?4 5?二羟基苯甲基甲醚。 |
| 一种大叶藻种子萌发、幼苗培育及海草场恢复方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201010172154.0, 申请日期: 2011-11-09, 公开日期: 2011-11-09
发明人: 周毅; 杨红生; 刘旭佳; 刘炳舰; 张涛; 刘鹰; 许强; 张明珠; 张福绥
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一种大叶藻种子萌发、幼苗培育及海草场恢复方法 其特征在于：采集整个大叶藻生殖株的种子 40?50天后即在8月下旬将冷藏保存种子的海水温度以每天升温1～2℃的速度 在普通海水中冷藏待用 升高到18～20℃ 从大叶藻种子发芽开始 在18～20℃下持续5?7天 先后在四个培育阶段可以将大叶藻幼苗栽培到适合大叶藻生长的自然海区中 种子将发芽 形成海草场 待用 即实现大叶藻海草场的恢复。 |
| 一种查尔霉素化合物的制备方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110080565.1, 申请日期: 2011-10-19, 公开日期: 2011-10-19
发明人: 丁玲; 秦松; 李富超; 张伟杰; 哈特穆特·拉赤
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一种查尔霉素化合物的制备方法 其特征在于：按如下步骤操作：1)固体培养：将海洋链霉菌m491接种于m2+固体培养基 其中链霉菌m491保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心cgmcc 在28?30℃下培养直至长出青灰色的孢子 保藏编号为：cgmcc?no.2446 2)摇床培养：将上述培养的0.5?1.0cm2带有孢子丝的琼脂块接种到200?250ml豆粉液体培养基 在28?35℃温度以110?130rpm的转速下进行摇床培养4?5天后 3)萃取：将上述发酵液用有机溶剂浸提3?4次 待用 合并有机相浓缩得粗提物 4)纯化：将粗提物经硅胶柱层析 以1?3l二氯甲烷 组分4经浓硫酸/茴香醛显色待含棕黄色的条带 2?4l二氯甲烷/2％甲醇 再将组分4经硅胶柱层析以二氯甲烷/7％甲醇进行梯度洗脱 1?3l二氯甲烷/5％甲醇 待以展开剂为二氯甲烷/10％甲醇时rf＝0.22?0.24处 1?3l二氯甲烷/10％甲醇梯度进行洗脱 分离得到式二化合物 流速为8?11ml/min 在rf＝0.25?0.27分离得到式三化合物。 将所得组分3经浓硫酸/茴香醛显色待含棕黄色的条带 经葡聚糖层析后 在展开剂为二氯甲烷/10％甲醇时rf＝0.50?0.52分离得到式一化合物 |
| 一种从霞水母刺丝囊毒素内分离致死毒素蛋白的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027667.7, 申请日期: 2011-09-07, 公开日期: 2011-09-07
发明人: 李鹏程; 李荣锋; 于华华; 冯金华; 邢荣娥; 刘松; 秦玉坤; 李克成; 孟祥涛; 崔金会
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一种从霞水母刺丝囊毒素中分离致死毒素蛋白的方法 其特征在于：1)将霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎 2)将上述步骤1)上清液于2～6℃下用缓冲液透析过夜 破碎后2～6℃离心 然后低温离心 3)将步骤2)所得上清液过滤 收集上清液 收集上清液 而后用含con?a?sepharose?4b亲和柱进行分离 4)将步骤3)得到的上清液用强阴离子交换树脂mono?q预装柱纯化分离 待用 待用 分离时采用含有0.1～0.3mα?甲基?d?甘露糖苷和0.1～0.3mnacl的ph7.4 依次采用ph7.8 浓度10～30mm的tris?hcl缓冲液进行洗脱并收集洗脱液 浓度为10～30mm的tris?hcl缓冲液和含1m?nacl的ph7.8 低温离心 浓度为10～30mm的tris?hcl缓冲液进行梯度洗脱 收集上清液 流速为0.2～0.5mlmin?1 待用 收集约25～40min洗脱液 即为从霞水母刺丝囊毒素中分离致死毒素蛋白。 |
| 一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027643.1, 申请日期: 2011-08-24, 公开日期: 2011-08-24
发明人: 尤锋; 吴志昊; 王伟; 徐冬冬; 张毅; 张培军; 徐永立
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1尾仔鱼/0.05?0.5ml无水乙醇 一种提取单个鱼卵仔鱼微量总dna的简便快速方法 其特征在于：1)样品固定：采集鱼卵或仔鱼 滤去水后立即加入无水乙醇 2)样品中固定液的去除：取步骤1)所得已固定的单个鱼卵或仔鱼样品 而后于?20℃或室温保存备用 加入生理盐水洗涤 3)样品消化：取上述洗涤过的单个鱼卵或仔鱼 鱼卵或仔鱼与无水乙醇比例为：1ml鱼卵/2?5ml无水乙醇 1000?2000g离心20?60秒去除多余生理盐水 加入100?300μl?dna提取缓冲液和10?30μl细胞裂解缓冲液 4)提取总dna：将步骤3)消化至澄清的溶液中加入100?300μl?5?6mol/l?nacl溶液 再用滤纸吸干样品 使细胞破壁 震荡20?30秒。15000g离心30分钟 重复2?3次 而后将细胞破壁的单个鱼卵或仔鱼加入10?100μg蛋白酶k和10?100μg?rna酶 吸取上清液使蛋白质去除 震荡混匀 然后在上清液中加入等体积异丙醇 于50?70℃温育 轻轻混匀 每10?20分钟颠倒混匀一次 ?20℃静置1?2小时 消化至溶液澄清 15000g离心15分钟 待用 沉淀即得到单个鱼卵仔鱼微量总dna。 |
| 一种从霞水母刺丝囊毒素内分离热激蛋白60的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201010596892.8, 申请日期: 2011-08-17, 公开日期: 2011-08-17
发明人: 李鹏程; 李荣锋; 于华华; 冯金华; 邢荣娥; 刘松; 秦玉坤; 李克成; 孟祥涛; 崔金会
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一种从霞水母刺丝囊毒素中分离热激蛋白60的方法 其特征在于：1)将从霞水母触手中得到的霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎 2)步骤1)所得上清液即为霞水母刺丝囊细胞毒素于2?6℃下对ph7.820mm?tris?hcl缓冲液透析过夜 破碎后低温离心 然后低温离心 3)将步骤2)所得上清液过滤 收集上清液 收集上清液 而后将其上含deae?sepharosefast?flow的阴离子交换树柱进行分离 4)将步骤3)用截留分子量为3kda的超滤管浓缩的浓缩物用凝胶树脂superdex75柱纯化分离 待用 待用 首先采用ph7.820mmtris?hcl缓冲液洗脱 采用含有浓度为0.15?0.5m的nacl的ph7.820mm?tris?hcl缓冲液洗脱 而后采用含有浓度分别为0.1?2m不同浓度的nacl的ph7.820mm?tris?hcl缓冲液进行梯度洗脱 流速为0.2?0.5mlmin?1 收集各洗脱峰 收集各洗脱峰 而后用截留分子量为3kda的超滤管浓缩 其中流出体积50ml?80ml内的组分即为热激蛋白60。 待用 |
| 一种链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201010261766.7, 申请日期: 2011-04-13, 公开日期: 2011-04-13
发明人: 陈英杰; 秦松; 刘少芳; 崔玉琳; 姜鹏; 陈华新; 李富超
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一种链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法 其特征在于：1)通过pcr反应将strep?ii标签基因分别连在别藻蓝蛋白apc的α和β亚基脱辅基蛋白基因的n末端 2)将strep?ii?apca基因片段插入到带有6×his基因的载体a中6×his基因的下游 分别得到strep?ii?apca和strep?ii?apcb基因片段 同时将藻胆素生物合成酶基因hol和pcya插入到载体上 将strep?ii?apcb基因片段插入到带有6×his基因的载体b中6×his基因的下游 待用 得到pcdf?strep?ii?apca?hol?pcya 同时将色基裂合酶基因cpcs和cpcu插入到载体上 3)将步骤2)所得两个表达载体同时转化大肠杆菌 待用 得到prsf?strep?ii?apcb?cpcs?cpcu 筛选获得同时表达上述基因的工程菌 4)将上述工程菌诱导培养后分离纯化 待用 得到双标签重组apc荧光蛋白质 5)将所得双标签重组apc荧光蛋白质与锌离子修饰的超顺磁性硅壳纳米颗粒振荡混合 即得到链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒。 |
