Cpx参与迟缓爱德华氏菌对环境压力的响应和致病作用

IOCAS-IR > 实验海洋生物学重点实验室

	Cpx参与迟缓爱德华氏菌对环境压力的响应和致病作用
	潘海建
学位类型	硕士
导师	莫照兰
	2012-05-24
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位专业	海洋生物学
关键词	迟缓爱德华氏菌lse40 Cpx 压力响应毒力基因转录水平
摘要	Cpx（conjugative plasmid expression）是存在于革兰氏阴性菌细胞膜上的双组分调节系统，能够感应外界环境变化，参与细菌细胞膜压力调节，维持细胞膜蛋白稳定性。迟缓爱德华氏菌Cpx的功能未知，本研究开展了如下工作：（1）对表型的影响。利用同源克隆获得LSE40菌株全长2,713bp的cpx基因簇，该Cpx含有编码组氨酸蛋白激酶CpxA、反应调节蛋白CpxR和抑制因子CpxP的基因。利用框内基因缺失突变技术，构建了cpx基因簇缺失突变株Δcpx和cpxR基因缺失株ΔcpxR。在正常培养条件下，两个突变株的生长、运动力、对抗生素的敏感性、自凝集、三型分泌系统（T3SS）输送器蛋白（EseB，EseC,EseD）分泌与野生型相比没有显著变化（P >0.05），cpx的缺失使细菌的菌膜形成能力减弱（P <0.05），而ΔcpxR的菌膜形成没有显著变化（P >0.05）；在缺铁和3.5% NaCl的培养条件下，两个突变株的生长无显著差异（P >0.05）；在1% H2O2和0.05% SDS培养条件下，两个突变株的生长显著下降（P <0.05）。上述结果表明Cpx参与了迟缓爱德华氏菌对氧化剂和表面活性剂等压力的响应。（2）对毒力的影响。检测了突变株对蓝曼龙(Trichogaster trichopterus)的毒力，浸泡感染结果显示Δcpx和ΔcpxR对蓝曼龙的毒力分别下降1.5倍和3.0倍，肌肉注射感染结果显示两突变株的毒力分别下降7.33倍和4.58倍，两株突变株在鱼体内的生存能力显著下降（P <0.05）。上述结果表明Cpx系统参与了对迟缓爱德华氏菌毒力的调控。（3）对基因转录水平的影响。qRT-PCR结果显示，用1mM H2O2处理迟缓爱德华氏菌LSE40后，cpxR基因的转录水平显著升高（P <0.05），表明H2O2处理可激活迟缓爱德华氏菌LSE40 cpxR的表达。cpx和cpxR缺失后，一些涉及抗氧化、蛋白正确折叠、细胞分离等过程的蛋白基因的转录水平与野生型细菌有显著性差异，在 cpxR互补株中的表达量又回复到野生型水平，表明CpxR参与对这些基因的调控。
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17766
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	潘海建. Cpx参与迟缓爱德华氏菌对环境压力的响应和致病作用[D]. 中国科学院研究生院,2012.

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文件名称/大小	文献类型	版本类型	开放类型	使用许可
Cpx参与迟缓爱德华氏菌对环境压力的响应（2720KB）			限制开放	CC BY-NC-SA	浏览