栉孔扇贝G-型溶菌酶基因多态性标记筛选及其辅助育种方法

IOCAS-IR > 实验海洋生物学重点实验室

	栉孔扇贝G-型溶菌酶基因多态性标记筛选及其辅助育种方法
	宋林生; 李凌; 赵建民
	2008-09-03
专利权人	中国科学院海洋研究所.
公开日期	2008-09-03
专利类型	发明
摘要	本发明是一种栉孔扇贝G-型溶菌酶基因多态性标记筛选及其辅助育种方法，属于水产生物技术领域中的贝类分子标记辅助育种技术，其主要内容包括栉孔扇贝G-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆，抗病和敏感群体的制备，抗病相关G-型溶菌酶基因标记的筛选，抗病个体的快速筛查以及基因标记辅助育种技术的建立。本发明克隆了栉孔扇贝G-型溶菌酶基因的启动区序列，并筛选了其多态性位点。其中-391 AG个体在抗病群体中出现的频率显著高于敏感群体，因此，以-391 AG作为栉孔扇贝抗病相关的G-型溶菌酶基因标记，建立了抗病相关基因标记辅助育种方法。本发明具有针对性强、选育效率高、操作简便快捷等特点，适用于贝类抗病相关标记的筛选和抗病优良品种的选育。
关键词	2)抗病群体和敏感群体的制备 1、一种栉孔扇贝抗病相关g-型溶菌酶基因标记 3)抗病相关g-型溶菌酶基因标记的筛选其特征在于它的技术内容包括以下四个方面：1)栉孔扇贝g-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆 4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查。1)栉孔扇贝g-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆：参照分子克隆所述方法从栉孔扇贝闭壳肌中提取总dna 根据已知的g-型溶菌酶基因序列在其启动子区设计引物克隆得到一段762个碱基的dna序列即从不同海区和养殖场收集栉孔扇贝个体连入t载体后进行测序用病原菌浸泡感染 Pcr扩增42个敏感个体和40个抗病个体的g-型溶菌酶启动区序列后其中-754id和-754ii个体在抗病群体和敏感群体中出现的频率无显著差别获得其核苷酸序列。2)抗病群体和敏感群体的制备：采用人工感染的方法获得抗病群体和敏感群体根据死亡时间判断扇贝对病原菌感染抵抗能力针对-754tatctcgatcagg插入/缺失(I/d)及-391a/g转换分别选用taq I和hap Ii对pcr产物进行酶切而-391aa个体在敏感群体中出现的频率显著高于抗病群体将扇贝分为抗病群体和敏感群体。3)抗病相关g-型溶菌酶基因标记的筛选：对来自5个个体的10个克隆进行了测序聚丙烯酰胺凝胶电泳后 -391ag个体在抗病群体中出现的频率显著高于敏感群体。因此发现了10处多态性位点各发现两种基因型将-391aa作为疾病敏感相关的g-型溶菌酶基因标记 -754ii 而将-391ag作为抗病相关的g-型溶菌酶基因标记。4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查：取栉孔扇贝个体全血1μl作为模版 -754id Pcr扩增g-型溶菌酶基因启动区序列 -391aa和-391ag 用hap Ii对产物进行酶切聚丙烯酰胺凝胶电泳分型后选择-391ag个体作为抗病个体。
申请日期	2008-04-02
专利号	CN200810015048.4
语种	中文
专利状态	公开
申请号	CN200810015048.4
文献类型	专利
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17380
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	宋林生,李凌,赵建民. 栉孔扇贝G-型溶菌酶基因多态性标记筛选及其辅助育种方法. CN200810015048.4[P]. 2008-09-03.

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栉孔扇贝G-型溶菌酶基因多态性标记筛选及（451KB）			限制开放	CC BY-NC-SA	浏览