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| 一种从泡叶藻中提取制备低分子岩藻聚糖硫酸酯的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201210424580.8, 申请日期: 2014-05-14, 公开日期: 2014-05-14
发明人: 韩丽君; 袁毅; 郭书举; 曲桂艳; 刘旭
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一种从泡叶藻中提取制备低分子岩藻聚糖硫酸酯的方法 其特征在于：1）将泡叶藻原料于40‑60℃下浸泡提取在泡叶藻原料干藻重量6‑10倍的稀盐酸溶液中1.3‑4.8h 酸浸泡后的泡叶藻固体继续加入其体积3‑6倍的水溶液 稀酸浸泡液待用 搅拌浸泡4‑7h 2）将上层漂浮物调节至ph5.5‑6.5 保留上层漂浮物 收集水浸泡液 在经过滤或高速离心 将上述依次经稀酸和水浸泡后固态藻体采用纳米高压均质机进行细胞破碎 将稀酸浸泡和水浸泡液合并待用 收集过滤液a 破碎后进行离心分离收集上清液b 3）将上述合并液、过滤液a和上清液b混合均匀后进行超滤去除盐分 而后超滤浓缩至原料重量的1/2体积（v/w） 4）将上述岩藻聚糖硫酸酯粗干品加入其3‑5倍重量的蒸馏水中进行溶解 浓缩液进行醇沉淀 溶解后通过装有deae‑sepharose f.f.的阴离子交换树脂柱进行洗脱 沉淀物干燥 收集洗脱液透析后于55‑65℃低温浓缩并冷冻干燥获得 即为岩藻聚糖硫酸酯粗干品 即得到原藻重量1.5‑2.3％的岩藻聚糖硫酸酯。 |
| 一种从水母触手中分离高纯度未释放刺丝囊的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310140315.1, 申请日期: 2013-08-07, 公开日期: 2013-08-07
发明人: 李鹏程 ; 薛伟; 于华华; 李荣锋; 邢荣娥; 刘松; 秦玉坤; 陈晓琳; 胡林峰
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一种从水母触手中分离高纯度未释放刺丝囊的方法 其特征在于：将冷冻溶解后水母触手离心 收集上清液 上清液经离心后 收集沉淀 将沉淀用海水溶解后 过滤收集滤液 离心后收集的沉淀为高纯度未释放的水母刺丝囊。 |
| 一种鲐鱼活性肽的制备方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310002099.4, 申请日期: 2013-05-08, 公开日期: 2013-05-08
发明人: 李鹏程; 王雪芹; 邢荣娥; 刘松; 于华华; 李克成; 李冰; 秦玉坤; 李荣锋
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一种鲐鱼活性肽的制备方法 其中每克经绞碎的原材料鲐鱼中加入1000u~2000u酶活力单位的蛋白酶。 其特征在于：以鲐鱼作为原材料经绞碎 调节ph值后加入蛋白酶进行酶解反应5h~8h 加入去离子水置于恒温水浴中经搅拌保温5~10min 反应完毕后 再调节ph值 酶灭活 离心 收集上清液 冷冻干燥 即得鲐鱼活性肽 |
| 一种从霞水母刺丝囊毒素内分离致死毒素蛋白的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027667.7, 申请日期: 2011-09-07, 公开日期: 2011-09-07
发明人: 李鹏程; 李荣锋; 于华华; 冯金华; 邢荣娥; 刘松; 秦玉坤; 李克成; 孟祥涛; 崔金会
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一种从霞水母刺丝囊毒素中分离致死毒素蛋白的方法 其特征在于：1)将霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎 2)将上述步骤1)上清液于2～6℃下用缓冲液透析过夜 破碎后2～6℃离心 然后低温离心 3)将步骤2)所得上清液过滤 收集上清液 收集上清液 而后用含con?a?sepharose?4b亲和柱进行分离 4)将步骤3)得到的上清液用强阴离子交换树脂mono?q预装柱纯化分离 待用 待用 分离时采用含有0.1～0.3mα?甲基?d?甘露糖苷和0.1～0.3mnacl的ph7.4 依次采用ph7.8 浓度10～30mm的tris?hcl缓冲液进行洗脱并收集洗脱液 浓度为10～30mm的tris?hcl缓冲液和含1m?nacl的ph7.8 低温离心 浓度为10～30mm的tris?hcl缓冲液进行梯度洗脱 收集上清液 流速为0.2～0.5mlmin?1 待用 收集约25～40min洗脱液 即为从霞水母刺丝囊毒素中分离致死毒素蛋白。 |
| 一种从霞水母刺丝囊毒素内分离热激蛋白60的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201010596892.8, 申请日期: 2011-08-17, 公开日期: 2011-08-17
发明人: 李鹏程; 李荣锋; 于华华; 冯金华; 邢荣娥; 刘松; 秦玉坤; 李克成; 孟祥涛; 崔金会
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一种从霞水母刺丝囊毒素中分离热激蛋白60的方法 其特征在于：1)将从霞水母触手中得到的霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎 2)步骤1)所得上清液即为霞水母刺丝囊细胞毒素于2?6℃下对ph7.820mm?tris?hcl缓冲液透析过夜 破碎后低温离心 然后低温离心 3)将步骤2)所得上清液过滤 收集上清液 收集上清液 而后将其上含deae?sepharosefast?flow的阴离子交换树柱进行分离 4)将步骤3)用截留分子量为3kda的超滤管浓缩的浓缩物用凝胶树脂superdex75柱纯化分离 待用 待用 首先采用ph7.820mmtris?hcl缓冲液洗脱 采用含有浓度为0.15?0.5m的nacl的ph7.820mm?tris?hcl缓冲液洗脱 而后采用含有浓度分别为0.1?2m不同浓度的nacl的ph7.820mm?tris?hcl缓冲液进行梯度洗脱 流速为0.2?0.5mlmin?1 收集各洗脱峰 收集各洗脱峰 而后用截留分子量为3kda的超滤管浓缩 其中流出体积50ml?80ml内的组分即为热激蛋白60。 待用 |
| 中国对虾抗菌肽基因的重组表达与应用 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN03112294.9, 申请日期: 2003-12-03, 公开日期: 2003-12-03
发明人: 王金星; 赵小凡; 相建海; 李富花
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1.中国对虾抗菌肽基因的重组表达方法 包括重组载体构建、转化与筛选和表达产物鉴定、纯化和抗菌谱测定其特征在于 所述的转化与筛选是：将构建得到的载体分别转化大肠杆菌和酵母菌及转染昆虫细胞 所述的重组载体构建是：根据已克隆到的对虾素成熟肽的cdna序列 筛选工程菌株或细胞并诱导表达 所述的表达产物鉴定、纯化和抗菌谱测定是：采用诱导剂诱导表达的工程菌 利用特异引物在其两端引入两个不同的限制性内切酶位点 破细胞收集上清液 亚克隆到表达载体 分泌型表达的细胞直接收集上清液 载体包括pet系列、pgex-4t系列、ppic系列、pao815和杆状病毒表达载体 采用层析的方法纯化抗菌肽 并测定抗菌谱。 |
