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一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色观察方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200510047579.8, 申请日期: 2007-05-02, 公开日期: 2007-05-02
发明人:  朱香萍;  尤锋;  张培军;  孙威;  徐永立
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权利要求书1、一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色和显微观察方法  其特征在于包括步骤如下：①采用改进的哌嗪-n  ②在解剖镜下挑选出发育状态正常的受精卵  N’-双2-乙烷磺酸配制的甲醛-戊二醛固定液对样品进行固定  并用解剖针将胚盘从整个受精卵中剥离出来  ③在常温下用浓度百分比为1-2％的triton-100对样品进行打孔处理  受精卵在该固定液中室温下抚育3-6小时  再在含有80-200mm Nabh4的磷酸盐缓冲液中  其中：磷酸盐缓冲液成分为128mm Nacl  磷酸吐温缓冲溶液清洗  室温下抚育6-16小时  2mm Kcl  ④采用改进的间接免疫荧光染色步骤对样品进行染色  然后在磷酸吐温缓冲溶液中于4℃下保存  8mm Nah2po4  其中：抚育抗体前非特异结合位点不封闭  抚育一抗过夜  抗体稀释液含有浓度百分比为10％的山羊血清和5％的二甲亚砜的tris盐酸缓冲液  待用  2mmkh2po4  抚育二抗为避光2-4小时  清洗液为含有155mm Nacl、10mm Tris-cl、ph为7.2-7.4的tris盐酸缓冲液  ⑤用荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜进行观察。  Ph 7.2-7.4  及诺纳德p-40  其中诺纳德p-40占tris盐酸缓冲液浓度百分比的0.1-0.2％