Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51和Asp69定点突变对酶活性的影响

doi:10.13386/j.issn1002-0306.2016.16.025

IOCAS-IR

	Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51和Asp69定点突变对酶活性的影响
	孙玉英 ; 严翠 ; 王淑军 ; 张继泉 ; 赵宏 ; 赵斌元
发表期刊	食品工业科技
ISSN	1002-0306
	2016-08-15
出版年	2016
卷号	v.37;No.360 期号:16 页码:157-161+167
文献类型	CNKI期刊论文
摘要	为确定Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶特定氨基酸与酶活性间的关系,以含壳聚糖酶基因的p CT7-CHISP6H-m Mschito质粒为模板,利用反向PCR的方法对壳聚糖酶两个可能的酶活性位点Glu51(突变成Gln51)和Asp69(突变成Asn69)进行突变,从而构建了两个单位点突变,突变质粒分别转化至Escherichia coli BL21(DE3)并经IPTG诱导表达,测定突变前后酶的比活性,突变酶(Asp69→Asn69)比活力与野生型相比几乎不变,而突变酶(Glu51→Gln51)比活力大约为野生型的10%。通过测定动力学常数发现,突变酶和天然酶Km几乎没有很明显的变化,但是突变酶(Glu51→Gln51)的Vmax与上述两种酶的Vmax相比有很明显的变化。采用DNA Star和Deep view分析软件,预测突变前后壳聚糖酶的二级结构和三级结构,结果表明,Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51极有可能是维持酶的催化活力的必需氨基酸,它的突变可能导致酶蛋白二级结构组件及氢键网络的改变,从而导致酶活力的丧失。
关键词	壳聚糖酶定点突变比活力必需氨基酸
CNKI专辑号	B;
CNKI专辑名称	工程科技Ⅰ辑;
CNKI专题号	B018;
CNKI专题名称	一般化学工业;
分类号	TQ925
收录类别	北大核心 ; 中科院扩展
语种	中文;
DOI	10.13386/j.issn1002-0306.2016.16.025
资助项目(基金）	碳谷-江苏海资院海洋先进材料联合研究中心开放课题(TG-201402) ; 江苏省科技项目产学研联合创新资金——前瞻性联合研究项目(BY2014085) ; 连云港市中小企业技术创新项目(CK1419)
引用统计
文献类型	CNKI期刊论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/189579
专题	中国科学院海洋研究所
作者单位	1.淮海工学院海洋学院 2.江苏省海洋资源开发研究院 3.中国科学院海洋研究所
推荐引用方式 GB/T 7714	孙玉英,严翠,王淑军,等. Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51和Asp69定点突变对酶活性的影响. 2016.