牙鲆芳香化酶Cyp19a多克隆抗体制备及其应用

IOCAS-IR

	牙鲆芳香化酶Cyp19a多克隆抗体制备及其应用
	舒畅 ; 王丽娟; 邹聪聪; 邹玉霞 ; 王国玉 ; 吴志昊 ; 李泽 ; 尤锋
发表期刊	海洋科学
ISSN	1000-3096
	2022-11-15
出版年	2022
卷号	v.46;No.401 期号:11 页码:85-95
文献类型	CNKI期刊论文
摘要	芳香化酶Cyp19a在鱼类性别决定和性别分化中起关键作用,通过调控体内雌、雄激素的转化来影响鱼类性别表型形成。为深入研究Cyp19a在牙鲆(Paralichthys olivaceus)性腺分化和发育过程中的表达规律及作用机制,本文从牙鲆cDNA中克隆获得1 557 bp的cyp19a基因编码序列,并成功构建了原核重组表达质粒。经体外重组与纯化获得较高纯度的重组Cyp19a蛋白;以此作为抗原免疫兔子,制备多克隆抗体。用间接酶联免疫吸附剂测定(ELISA)技术检测抗血清效价,评估其免疫原性。结果表明免疫结束后得到的抗体血清效价超过了1∶50 000,且纯化后抗体具有较好活性。Western Blot (WB)检测结果表明Cyp19a兔多抗可以特异性识别牙鲆重组Cyp19a蛋白和内源性Cyp19a蛋白。蛋白水平的雌雄性腺差异表达分析显示,牙鲆Cyp19a蛋白在卵巢中高表达,在精巢中微量表达。利用Foxl2和Dmrt1重组蛋白处理牙鲆性腺分化期幼鱼可分别显著上调和下调Cyp19a的表达(P<0.05)。综上所述,本研究成功制备了牙鲆Cyp19a多克隆抗体并进行了应用,为深入研究牙鲆等鱼类性别分化机制提供有力工具。
关键词	牙鲆(Paralichthys olivaceus) Cyp19a 重组蛋白多克隆抗体蛋白表达
CNKI专辑号	A;D;
CNKI专辑名称	基础科学;农业科技;
CNKI专题号	D052;
CNKI专题名称	水产和渔业;
分类号	S917.4
收录类别	北大核心 ; 中科院核心 ; 中科院扩展
语种	中文;
资助项目(基金）	国家自然科学基金项目(31872558) ; 国家重点研发计划项目(2018YFD0900202) ; 青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室青年科学基金项目(YQ2018NO01) ; 山东省重点研发计划项目(农业良种工程,2021LZGC029) ; 山东省自然科学基金项目(ZR2022MC026)~~
文献类型	CNKI期刊论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/187275
专题	中国科学院海洋研究所
作者单位	1.中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室海洋大科学中心山东省实验海洋生物学重点实验室 2.青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室 3.中国科学院大学
推荐引用方式 GB/T 7714	舒畅,王丽娟,邹聪聪,等. 牙鲆芳香化酶Cyp19a多克隆抗体制备及其应用. 2022.