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	中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）模式识别丝氨酸蛋白酶(EsPRSP)和丝氨酸蛋白酶抑制剂(Esserpin)基因的表达与功能研究
	马照鹏
学位类型	硕士
导师	王玲玲
	2013-04
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位专业	海洋生物学
关键词	中华绒螯蟹 模式识别丝氨酸蛋白酶 丝氨酸蛋白酶抑制剂 微生物刺激 抑菌活性 酚氧化酶激活系统
摘要	中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）是我国的特色甲壳类物种，具有重要的经济和科研价值。酚氧化酶系统作为无脊椎动物特有的固有免疫机制，在中华绒螯蟹的免疫反应中发挥了重要作用。本研究在中华绒螯蟹酚氧化酶系统2个已知基因（模式识别丝氨酸蛋白酶EsPRSP、丝氨酸蛋白酶抑制剂Esserpin）cDNA全长序列的基础上，利用分子、细胞、生物信息学等技术对EsPRSP和Esserpin的表达和功能进行了分析。 中华绒螯蟹EsPRSP基因在检测的六个组织（心脏、肌肉、血淋巴细胞、肝胰腺、鳃和表皮）中均有表达，其中在血淋巴细胞中检测到最高表达水平，约为心脏中表达水平的7.17倍（P < 0.05），其次是肝胰腺、肌肉、鳃，分别为心脏中表达水平的3.18倍（P < 0.05）、2.74倍（P < 0.05）、1.63倍（P < 0.05），而在表皮中的表达水平与心脏相比，未检测到显著差异（P > 0.05）。在中华绒螯蟹受到鳗弧菌刺激24 h以及毕赤酵母刺激12 h后，血淋巴细胞中的EsPRSP基因表达量显著增加，分别是空白组表达量的2.31倍（P < 0.05）、2.56倍（P < 0.05）。重组蛋白rEsPRSP在细菌生长对数期，能够明显抑制大肠杆菌和鳗弧菌的生长，表现出一定的抑菌活性。同时加入鳗弧菌和rEsPRSP的血清中，相比于空白血清PO活性显著上升（P < 0.05）。鳗弧菌可以诱导血清中酚氧化酶系统相关因子的产生，这对EsPRSP功能的行使是必须的。 中华绒螯蟹Esserpin基因在检测的六个组织（心脏、肌肉、血淋巴细胞、肝胰腺、鳃和性腺）中均有表达，其中在性腺中检测到最高表达水平，约为血淋巴细胞中表达水平的62.50倍（P < 0.05），其次是肌肉，约为血淋巴细胞中表达水平的9.93倍（P < 0.05）。而在心脏、鳃、肝胰腺中的表达水平与血淋巴细胞相比，未检测到显著差异（P > 0.05）。在中华绒螯蟹受到鳗弧菌刺激24 h以及毕赤酵母刺激3 h后，血淋巴细胞中的Esserpin基因表达量显著增加，分别是空白组表达量的5.18倍（P < 0.05）、2.87倍（P < 0.05）。重组蛋白rEsserpin 对trypsin活性的抑制存在剂量效应，当rEsserpin的浓度达到873.76 nM时，trypsin的活性被100%抑制。未检测到rEsserpin对chymotrypsin的抑制活性。rEsserpin对大肠杆菌和鳗弧菌的生长也有一定的抑制作用。加入rEsserpin的血清，与空白组和rTrx对照组的血清相比，PO活性显著下降（P < 0.05）。结果表明，Esserpin能被免疫刺激诱导表达，通过抑制细菌生长或调控酚氧化酶激活系统来介导免疫反应。 上述研究结果表明，模式识别丝氨酸蛋白酶(EsPRSP)和丝氨酸蛋白酶抑制剂(Esserpin)基因参与了中华绒螯蟹的免疫反应并发挥了重要作用，进一步揭示了无脊椎动物酚氧化酶系统的分子基础和调控机制，丰富了无脊椎动物的免疫学内容。
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17812
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	马照鹏. 中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）模式识别丝氨酸蛋白酶(EsPRSP)和丝氨酸蛋白酶抑制剂(Esserpin)基因的表达与功能研究[D]. 中国科学院研究生院,2013.

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中华绒螯蟹（Eriocheir sine（1492KB）			限制开放	CC BY-NC-SA	浏览

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