半滑舌鳎 （Cynoglossus semilaevis）免疫相关基因CsG3BP的克隆、表达及功能研究

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	半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）免疫相关基因CsG3BP的克隆、表达及功能研究
	陈骋
学位类型	硕士
导师	孙黎
	2013-05
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位专业	海洋生物学
关键词	半乳糖凝集素-3结合蛋白半滑舌鳎 Srcr结构域吞噬作用
摘要	半乳糖凝集素3结合蛋白（Galectin-3 binding protein，G3BP）是存在于脊椎动物体内的一种分泌性糖蛋白，可与半乳糖凝集素3相结合。在人中，G3BP广泛分布于血清、乳汁、尿液等多种体液中，可行使多种生物学功能，参与癌症和病毒感染等病理过程。在鱼类中，G3BP样蛋白的相关研究还鲜有报道，目前仅在斑马鱼、虹鳟等少数种类中发现了G3BP样基因的存在，但其生物学功能未知。本研究以我国北方重要经济鱼类半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）为研究对象，克隆鉴定了它的一个G3BP样基因——CsG3BP，并对其进行了结构特点的预测、重组蛋白表达及蛋白功能的检测。CsG3BP基因cDNA全长2016 bp，其包含1689 bp的开放阅读框（ORF）编码一个含有565个氨基酸残基的蛋白。该蛋白与哺乳类及其他鱼类的G3BP样蛋白有30.6 - 47.8%的序列相似性。CsG3BP中含有一个清道夫受体（Scavenger Receptor Cysteine-rich，SRCR）结构域，其中包含6个特征性的保守半胱氨酸残基，分别为C65、C78、C109、C119、C129和C139，它们两两形成二硫键。在正常生理条件下，CsG3BP在半滑舌鳎的肝、脾、肾、鳃、肠、脑、心、血、肌中均有表达，其中在血细胞中的表达量最高，而在肠中表达量最低。在病原感染条件下，CsG3BP在肝、脾、肾、血四个组织中的表达均显著上调。其中，在脾、肾和血中，CsG3BP mRNA水平在细菌感染后12小时达到最高，分别是对照组的36.5、67.8和6.1倍（P<0.05）；在肝中，CsG3BP mRNA的表达量在细菌感染后4小时达到最高，上调49.8倍。当用细胞肿大病毒感染半滑舌鳎后，CsG3BP的mRNA水平也呈现类似的上升趋势，但是表达上调幅度没有细菌感染时明显。我们通过大肠杆菌体外表达系统获得了重组的半滑舌鳎G3BP样蛋白—— rCsG3BP，并制备了针对该蛋白的多克隆抗体。功能研究结果表明该蛋白具有剂量依赖性的细菌（革兰氏阴性菌和阳性菌）结合活性，并且对革兰氏阴性菌具有一定偏好性。突变分析发现，SRCR结构域缺失和保守半胱氨酸位点突变的重组蛋白均丧失了结合细菌的能力。免疫印迹实验结果表明，天然CsG3BP的存在于半滑舌鳎外周血白细胞培养上清和血清中，而流式细胞术分析表明，抗rCsG3BP抗体的中和作用可使半滑舌鳎外周血白细胞对病原的吞噬能力明显下降。综上所述， CsG3BP是一种分泌蛋白，在半滑舌鳎体内分布广泛，在鱼体抗感染免疫中发挥作用，是一种重要的固有免疫因子。它的作用方式可能是借助其SRCR结构域与病原非特异性结合，进而促进吞噬细胞对病原的吞噬作用。本研究增进了对鱼类固有免疫系统和抗感染免疫的理解。
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17795
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	陈骋. 半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）免疫相关基因CsG3BP的克隆、表达及功能研究[D]. 中国科学院研究生院,2013.

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