凡纳滨对虾和是华绒螯蟹免疫相关因子功能及应用的初步研究

IOCAS-IR > 实验海洋生物学重点实验室

	凡纳滨对虾和是华绒螯蟹免疫相关因子功能及应用的初步研究
	张莹
学位类型	博士
导师	宋林生
	2010-05-01
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位专业	海洋生物学
关键词	凡纳滨对虾中华绒螫蟹免疫防御免疫防治 Cpg脱氧寡核苷酸
摘要	甲壳动物在水产养殖业中占据十分重要的地位，深入开展免疫防御机制的相关研究，探索免疫防治新途径，是实现其健康养殖的可靠保障。本研究通过RACE技术获得了凡纳滨对虾的整连因子LvIntegrin，C型凝集素LvLec，以及中华绒螯蟹的细胞因子抑制因子 EsSOCS2和抗脂多糖因子EsALF-2的cDNA全长序列。通过RT-PCR法研究了它们对不同微生物刺激的响应，并对功能结构域原核重组蛋白进行了相关活性测定。同时检测了CpG ODNs注射处理后中华绒螯蟹的部分免疫指标和受WSSV感染的凡纳滨对虾的存活率、病毒拷贝数及抗病毒相关因子的变化，初步获得以下结果。凡纳滨对虾LvIntegrin和LvLec cDNA全长为2621和618 bp，分别具有典型的特征结构域β-integrin亚基和CRD。LvIntegrin在受到鳗弧菌侵染时，mRNA表达水平均显著提高。重组LvIntegrin具有Ca~(2+)依赖的大肠杆菌、鳗弧菌、溶壁微球菌和毕赤酵母的凝集活性，同时具有促进人成纤维细胞增殖的作用。LvIntegrin基因干扰后感染鳗弧菌的对虾死亡率升高，抗体阻断LvIntegrin蛋白后，感染鳗弧菌的对虾中酚氧化物酶原基因的表达受到抑制。重组的LvLec具有Ca~(2+)依赖的大肠杆菌凝集活性，该活性可被甘露糖抑制，提示该蛋白属于甘露糖结合型的C型凝集素。中华绒螯蟹EsSOCS2和EsALF-2 cDNA全长分别为2535和724 bp，EsSOCS2含有典型的ESS、SH2和SOCS box三个结构域。EsSOCS2和EsALF-2在各检测组织中呈组成型表达，且分别在鳗弧菌、藤黄微球菌和鳗弧菌、毕赤酵母的诱导下，表达量显著增加。重组的EsALF-2具有抑制鲠弧菌和毕赤酵母生长的作用，而对革兰氏阳性菌不起作用。合成CpG ODNs处理中华绒螯蟹和凡纳滨对虾，发现0．1 μg的CpG ODNs可抑制ROS的产生，促进酚氧化物酶和溶菌酶活性增强，并诱导抗菌肽Crustin的mRNA表达。经CpG ODNs预处理的对虾感染WSSV后，存活率显著高于对照组，且对虾体内病毒拷贝数显著降低，同时对虾血淋巴细胞中ROS水平和Dicer、STAT的mRNA表达量显著增加，而 Argonaute表达水平未发现显著变化。提示CpG ODNs通过间接抑制WSSV病毒的复制，诱导对虾防御WSSV的免疫保护作用。结果表明，LvIntegrin、LvLec、EsSOCS2和EsALF-2是虾蟹类重要的免疫防御因子，均参与了凡纳滨对虾和中华绒螫蟹的免疫防御反应。CoG ODNs能激活虾蟹类固有免疫防御体系，在抵御wSSV侵染过程中起重要保护作用，可作为免疫增强剂用于虾蟹类养殖动物的免疫防治。该研究结果对深入了解海洋无脊椎动物免疫防御机制，发展免疫防治方法和途径具有理论意义和应用价值。
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17792
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	张莹. 凡纳滨对虾和是华绒螯蟹免疫相关因子功能及应用的初步研究[D]. 中国科学院研究生院,2010.