Cpx双组分调控系统在鳗弧菌应对环境压力和致病性中的作用

IOCAS-IR > 实验海洋生物学重点实验室

	Cpx双组分调控系统在鳗弧菌应对环境压力和致病性中的作用
	王妍妍
学位类型	硕士
导师	莫照兰
	2011-05-24
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位专业	海洋生物学
关键词	鳗弧菌 Cpx双组分调控系统压力反应毒力
摘要	Cpx双组分调控系统广泛存在于多种革兰氏阴性细菌，主要参与细菌膜压力变化的调控。作为信号感应器的组氨酸激酶CpxA感应外界环境信号，并传递给反应调节蛋白CpxR，后者作为转录调控因子调控靶基因表达，帮助细菌应对环境变化。我们利用简并PCR和染色体步移技术，从鳗弧菌（Vibrio anguillarum）M3菌株的基因组克隆得到cpx基因簇，全长2768 bp。氨基酸序列分析表明，CpxR、CpxA与大肠杆菌和霍乱弧菌的相似性分别为60%和84%、45%和72%。为了研究Cpx系统的功能，我们构建了cpxR和cpxA基因的非极性缺失突变株。表型特征分析显示，cpxR和cpxA的缺失对鳗弧菌的泳动、明胶酶活力、3.5%盐度下的生长能力没有明显影响（P >0.05），但是使鳗弧菌的菌膜形成能力减弱，对过氧化氢和SDS的敏感性增加，在pH9.0条件下的生长速度加快（P <0.05），对先锋霉素V和头孢呋肟的敏感性发生变化，表明鳗弧菌的Cpx系统参与了细菌对某些环境压力的感应和调控。我们以肌肉注射攻毒、浸泡攻毒和细菌体内存活分析等三个方面研究了突变株对蓝鳗龙致病能力的变化，结果显示，以注射途径进行攻毒，cpxR和cpxA缺失分别使细菌的半数致死量LD50提高了24.6倍和13.3倍，注射后突变株在鱼体内的存活能力都有所降低，而以浸泡途径进行攻毒，突变株和野生株的毒力没有明显变化，但是实验鱼的死亡时间延后，表明Cpx系统参与了鳗弧菌毒力的调控。我们进一步用实时定量PCR（qRT-PCR）分析了cpxRA对10个毒力相关基因转录水平的影响，包括转录调控因子基因rpoS和rpoN，密度感应系统调控基因vanT，金属蛋白酶基因empA和prtV，胞外多糖合成和运输基因wza和wbfD，鞭毛蛋白基因flaA，六型分泌系统基因hcp和icmF。初步结果显示，上述基因的转录水平有一定变化，生物信息学分析初步表明，这些基因不是Cpx系统直接作用的靶基因，它们受到Cpx的影响尚待进一步研究证实。
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17768
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	王妍妍. Cpx双组分调控系统在鳗弧菌应对环境压力和致病性中的作用[D]. 中国科学院研究生院,2011.

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Cpx双组分调控系统在鳗弧菌应对环境压力（2096KB）			限制开放	CC BY-NC-SA	浏览