中国明对虾核转录因子NF-κB家族基因在免疫调控中的功能研

IOCAS-IR > 实验海洋生物学重点实验室

	中国明对虾核转录因子NF-κB家族基因在免疫调控中的功能研
	王冬冬
学位类型	博士
导师	李富花
	2012-05-18
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位专业	海洋生物学
关键词	中国明对虾 Nf-κb家族基因抗菌肽溶壁微球菌鳗弧菌 Rna干扰 Real-time Rt-pcr 抑制性消减杂交
摘要	核转录因子NF-κB家族基因控制着无脊椎动物多条重要的免疫信号通路，产生免疫效应因子来抵抗外界的病原刺激。本论文以中国明对虾为研究对象，采用分子克隆、real-time reverse transcription-polymerase chain reaction（RT-PCR）、RNA interference（RNAi）和suppression subtractive hybridization（SSH）等技术，对NF-κB转录因子在对虾抗病免疫中的调控作用进行研究，为阐明对虾的先天免疫机制奠定基础。本论文取得的主要进展有： 1. 利用rapid-amplification of cDNA ends（RACE）等方法克隆到中国明对虾Relish基因的第二种cDNA——FcRelish2。与已报道的FcRelish比较，FcRelish2除含有完整的Rel homology domain（RHD）、核定位信号nucleus localization signal（NLS）外，还含有六个锚蛋白重复序列ankyrin repeats（ANKs）、死亡结构域death domain（DD）以及caspase cleavage site。多序列比对和系统进化分析表明FcRelish2与节肢动物的Relish同源蛋白有很高的相似性。对Relish基因组DNA序列的结构分析表明，FcRelish和FcRelish2为Relish基因mRNA的两种可变剪接形式；Relish基因组DNA含有一个启动子序列、一个转录起始位点和多个转录因子结合位点，其中在Relish基因中含有Dorsal转录因子结合位点。 2. 通过real-time PCR的方法检测了不同抗菌肽Penaeidin3（Pen3）、Penaeidin5（Pen5）、crustin和anti-lipopolysaccharide factor（ALF）在注射两种不同类型细菌（G+菌——溶壁微球菌Micrococcus lysodeikticus和G-菌——鳗弧菌Vibrio anguillarium）后的转录表达变化，结果表明不仅不同抗菌肽在同种细菌注射后的表达变化模式不同，而且同一种抗菌肽在不同细菌注射后的表达变化也不相同。G+菌、G-菌和对虾白斑综合症病毒（white spot syndrome virus，WSSV）的注射均能引起Relish基因的表达变化，Relish基因可以调控不同类型抗菌肽的转录表达。 3. G+菌、G-菌和WSSV的注射均能引起Dorsal基因的表达变化，但G-菌注射引起的Relish表达反应比Dorsal更快。Dorsal基因也能调控不同类型抗菌肽的转录表达。 4. 利用同源克隆和RACE等方法首次在对虾中克隆到NF-κB家族的抑制蛋白Cactus基因的cDNA——FcCactus。FcCactus含有ANKs等重要的IκB同源蛋白特征，与其它七种节肢动物的IκB同源蛋白具有很高的相似性。FcCactus基因的mRNA在被检测的所有组织中都有表达，且在肌肉、血细胞、心脏和淋巴器官中的表达量最高。G+菌、G-菌和WSSV的注射均能引起FcCactus的表达变化， FcCactus能调控不同类型抗菌肽和抗病毒因子AV的转录表达。 5. 利用RNAi的方法研究Dorsal、Relish和Cactus基因三者的功能关系。结果表明，Dorsal被干扰后可引起Relish2的下调表达和Cactus的上调表达；Relish被干扰后可引起Cactus的上调表达，但不能引起Dorsal的表达变化；Cactus被干扰后均可引起Relish和Dorsal基因的上调表达。推测Dorsal可能调控Relish基因的转录表达，Cactus、Dorsal和Relish基因之间在功能上是相互联系的。 6. 首次结合RNAi和SSH的方法，建立了Relish-RNAi后的正向和反向消减文库，筛选到多种受Relish调控的基因。正向文库筛选到43个unique基因，反向文库筛选到57个unique基因。选取其中的12个差异表达基因进行半定量RT-PCR检测的结果表明，早期表皮蛋白ECP1和ECP5、Toll样受体TLRP、C型凝集素受体CLR、凝血栓敏感蛋白TSP和抗病毒因子AV等基因在Relish-RNAi后的表达量下调；而S-腺苷甲硫氨酸合成酶SAMS、凝集素carcinolectin5a和5b-5等基因在Relish-RNAi后的表达量上调。
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17751
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	王冬冬. 中国明对虾核转录因子NF-κB家族基因在免疫调控中的功能研[D]. 中国科学院研究生院,2012.

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中国明对虾核转录因子NF-κB家族基因在（10730KB）			限制开放	CC BY-NC-SA	浏览