一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色观察方法

IOCAS-IR > 实验海洋生物学重点实验室

	一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色观察方法
	朱香萍; 尤锋; 张培军; 孙威; 徐永立
	2007-05-02
专利权人	中国科学院海洋研究所.
公开日期	2007-05-02
专利类型	发明
摘要	本发明公开一种鲆鲽鱼类受精卵细胞骨架的免疫荧光显微观察技术。首先采用改进的固定液对样品进行固定，然后用解剖针将胚盘从整个胚胎中剥离出来，对样品进行打孔处理，并用硼氢化钠降低或消除未结合的醛基对实验结果的影响，再对样品进行间接免疫荧光染色，最后用荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜对样品进行观察。该发明的优点是操作过程简单，结果清晰度高，立体感强，可用于鲆鲽鱼类受精卵从胚盘形成到2-细胞、4-细胞、8-细胞、16-细胞等发育时期的微管骨架的动态变化研究，也适用于同属浮性卵、多卵黄的其它海水鱼类卵的免疫组化研究中，其适用范围广泛。
关键词	权利要求书1、一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色和显微观察方法其特征在于包括步骤如下：①采用改进的哌嗪-n ②在解剖镜下挑选出发育状态正常的受精卵 N’-双2-乙烷磺酸配制的甲醛-戊二醛固定液对样品进行固定并用解剖针将胚盘从整个受精卵中剥离出来 ③在常温下用浓度百分比为1-2％的triton-100对样品进行打孔处理受精卵在该固定液中室温下抚育3-6小时再在含有80-200mm Nabh4的磷酸盐缓冲液中其中：磷酸盐缓冲液成分为128mm Nacl 磷酸吐温缓冲溶液清洗室温下抚育6-16小时 2mm Kcl ④采用改进的间接免疫荧光染色步骤对样品进行染色然后在磷酸吐温缓冲溶液中于4℃下保存 8mm Nah2po4 其中：抚育抗体前非特异结合位点不封闭抚育一抗过夜抗体稀释液含有浓度百分比为10％的山羊血清和5％的二甲亚砜的tris盐酸缓冲液待用 2mmkh2po4 抚育二抗为避光2-4小时清洗液为含有155mm Nacl、10mm Tris-cl、ph为7.2-7.4的tris盐酸缓冲液 ⑤用荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜进行观察。 Ph 7.2-7.4 及诺纳德p-40 其中诺纳德p-40占tris盐酸缓冲液浓度百分比的0.1-0.2％
申请日期	2005-10-28
专利号	CN200510047579.8
语种	中文
专利状态	公开
申请号	CN200510047579.8
文献类型	专利
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17400
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	朱香萍,尤锋,张培军,等. 一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色观察方法. CN200510047579.8[P]. 2007-05-02.

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一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色观（674KB）			限制开放	CC BY-NC-SA	浏览